SETOR ECONÔMICO:

Biotecnologia

PROBLEMA QUE SOLUCIONA:

A invenção soluciona dois problemas relevantes no cenário epidemiológico atual da malária: a identificação de infecções com baixa parasitemia e a identificação da malária zoonótica.

O diagnóstico adequado de malária permanece como um dos pilares dos programas de controle da doença no mundo. Entretanto, os métodos de diagnóstico de rotina (microscopia e teste rápidos) não são suficientemente sensíveis na detecção de infecções com parasitemia muito baixa (submicroscópicas e subpatentes). De fato, nos últimos anos, a incidência de malária no Brasil vem reduzindo significativamente, particularmente, em virtude das medidas de controle. Neste novo cenário, faz-se necessário identificar e tratar a malária submicroscópica e subpatente, uma vez que estes indivíduos constituem fonte de infecção para o mosquito vetor.

Apesar da maioria dos casos de malária no Brasil estarem restritos à região Amazônica, a susceptibilidade e vulnerabilidade presente em todo território nacional resulta na ocorrência de casos autóctones na região extra-Amazônica. Estes ocorrências podem estar associadas a casos importados e à transmissão zoonótica da Malária em áreas de Mata Atlântica. A transmissão zoonótica é relacionada à infecção pelo Plasmodium simium decorrente da entrada de humanos em regiões de Mata com primatas não-humanos infectados por esse parasito. Por outro lado, os casos importados são ocasionados pela migração das áreas endêmicas de indivíduos infectados, principalmente por Plasmodium vivax, mais frequente no Brasil. As medidas de vigilância associadas a estes dois tipos são completamente distintas. Assim, o diagnóstico diferencial da infecção por estas duas espécies é fundamental na definição de estratégias de prevenção e controle pelo programa de controle da malária. Devido à alta similaridade em níveis morfológicos, genéticos e imunológicos entre os parasitos P. vivax e P. simium, uma ferramenta para diagnóstico diferencial ainda não se encontra disponível comercialmente.

SOLUÇÃO APRESENTADA:

A presente invenção apresenta insumos e duas metodologias de diagnóstico capazes de identificar a infecção por Plasmodium e discriminar transmissão zoonótica por Plasmodium simium. As ferramentas se baseiam na identificação, pelos inventores, de dois únicos polimorfismos de base única (SNP) distintivos, presentes no genoma mitocondrial do parasito, que permite a diferenciação entre P. simium e todas as outras espécies de Plasmodium. Assim, foi desenvolvido ensaio para amplificação do alvo mitocondrial gênero-específico, permitindo a identificação de espécies do gênero Plasmodium sp. em geral, e estratégias para diagnóstico diferencial.

A primeira metodologia, de baixo custo, se baseia na amplificação do fragmento do DNA mitocondrial do parasito - permitindo a detecção de infecção por qualquer espécie de Plasmodium e posterior digestão do produto amplificado com uma enzima de restrição que tem como alvo o SNP característico de P. simium, permitindo o diagnóstico diferencial da malária zoonótica (Nested PCR-RFLP). 

A segunda metodologia também se baseia na amplificação do fragmento do DNA mitocondrial do parasito, mas utiliza PCR quantitativo em tempo real (qPCR) para discriminação alélica baseada na utilização de duas sondas - uma específica para P. vivax e outra específica para P. simium. Essa segunda metodologia pode ser utilizada em larga escala e permite correlação com a parasitemia do paciente. Está em desenvolvimento o desenho de sonda específica para P. falciparum, o que tornará possível, inclusive, a definição do tratamento adequado ao paciente.

PRINCIPAIS VANTAGENS E BENEFÍCIOS:

- Alta sensibilidade: a utilização de um alvo mitocondrial permite a detecção de parasitemias bastante reduzidas, incluindo as sub-patentes e sub-microscópicas, não detectadas pelo teste padrão ouro preconizado pelo Ministério da Saúde, a microscopia ótica.

- Discriminação das infecções por Plasmodium decorrentes da transmissão zoonótica do Plasmodium simium.

- Possibilidade de utilização em larga escala.

- Possibilidade de identificação da carga parasitária.

POTENCIAIS E APLICAÇÕES:

A tecnologia pode ser empregada, por exemplo, em:

- Laboratórios de análises clínicas e Laboratórios de referência em malária: Diagnóstico da malária com alta sensibilidade, pela possibilidade de detecção da infecção por Plasmodium em baixa parasitemia.

- Hemocentros: Triagem de amostras de bancos de sangue para excluir infecção por Plasmodium, deixando-se de descartar amostras de indivíduos que relatam viagem às áreas de transmissão nos últimos 6 meses, para descartar apenas aqueles que relatam viagem no último mês.

- Programa de Controle da Malária: Distribuição de kits no âmbito do SUS, e promoção de ações de vigilância epidemiológica da transmissão zoonótica da malária na Mata Atlântica, permitindo, por exemplo, definição de áreas de risco para implementação de medidas específicas de prevenção e controle.

ESTÁGIO DE DESENVOLVIMENTO:

As duas metodologias já foram testadas em amostras de primatas não-humanos e humanos, totalizando cerca de 100 amostras. Atualmente, tem-se a necessidade de obter o protótipo do kit utilizando a metodologia Nested PCR-RFLP e a metodologia qPCR.

TITULARES:

FUNDAÇÃO OSWALDO CRUZ MINAS (FIOCRUZ - MG)

UNIVERSIDADE REGIONAL DE BLUMENAU (FURB)

NÚMERO DO PROCESSO DO INPI:

BR 10 2019 006132 4

INFORMAÇÕES PARA CONTATO:

NIT FIOCRUZ - MG: cristina.carrara@fiocruz.br

LINKS ÚTEIS:

Acesse o pedido de patente de invenção na íntegra aqui.